Темы подробно описаны в требованиях

Актуальность. Saccharomyces cerevisiae является одним из наиболее изученных видов дрожжевых грибов, который широко используется в генной инженерии для изучения морфологической и функциональной организации микроорганизма, в зависимости от экспрессии определенных видов генов. Систематизация и актуализация знаний о данном микроорганизме позволит использовать полученную информацию в целях практической медицины, фармакологии, биохимии и биоинженерии. Цель – изучить и систематизировать знания об отдельных морфологических структурах и ферментных системах дрожжевого гриба Saccharomyces cerevisiae. Задачи: 1. Изучить современные представления о строении и регуляции структурной организации клеточной стенки Saccharomyces cerevisiae; 2.

---

Если вам нужно узнать, сколько стоит написать студенческую работу, переходите на сайт Work5.

---

. Проанализировать функции и регуляцию экспрессии ферментов группы кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae; 3. Проанализировать функции и регуляцию экспрессии фермента глюкантрансфераза Saccharomyces cerevisiae; 4. Изучить функцию и регуляцию активности белков ГТфазы дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Данная реферативная работа по структуре состоит из введения, основной части, включающей 4 раздела и заключения. Данная структура работа является оптимальной для решения поставленной цели и реализации обозначенных задач.  

В ходе проведения данной работы были сделаны следующие выводы. Клеточная стенка дрожжевых грибов Saccharomyces cerevisiae имеет различное строение, в зависимости от формы существования данного микроорганизма. Ее химическое строение и структурная организация значительно отличается у аскоспор и вегетативных форм данного вида. Клеточная стенка вегетативных форм включает углеводные полимеры и гликопротеины сложного строения, такие как хитин, маннаны, глюканы, глюкоманнаны, галактоманнаны, рамноманнанны и фосфоманнаны. Аскоспоры, помимо вышеперечисленных соединений включают в себя хитозан и дитирозин, что является отличительной чертой грибов Saccharomyces cerevisiae. Изучение ферментов группы кислых фосфатаз дрожжей Saccharomyces cerevisiae позволило сделать вывод, что данная группа представляет собой несколько групп гидролизных ферментов, способных отделять фосфатный участок от молекулы вещества в кислой среде. Основными представителями данного класса ферментов у Saccharomyces cerevisiae является кислая фосфатаза PHO5 и Mg2+-зависимая фосфатаза, которые отличаются по функциям и регуляции. Регуляция содержания кислых фосфатаз осуществляется несколькими путями. Преимущественным путем для кислой фосфатазы PHO5 является генетический механизм, посредством которого регулируется экспрессия специфических генов PHO2 , PHO4 и PHO81. Изменение концентрации Магний-зависимой фосфатазы происходит за счет механизма обратной связи, зависимости от внутриклеточного содержания липидов, нуклеотидов и активности процесс фосфолирирования сайтов фосфотидилфосфогидролазы (Mg2+-зависимая фосфатазы). Изучение глюкотрансфераз грибов Saccharomyces cerevisiae продемонстрировало наличие семи белков клеточной стенки, из которых не все обладают амилоидогенной активностью. Доказанными участками амилоидогенеза обладают несколько белков: Exg1p, Bgl2p. Синтез амилоида – является важным процессом в метаболизме клеток дрожжей. Данная группа фибриллярных белков обеспечивает функциональное покрытие для этих микроорганизмов, выполняя защитную и адаптационную функцию, а также связаны с ростом и формированием клеточной стенки аскоспор Saccharomyces cerevisiae. Как продемонстрировал реферативный анализ литературы, ГТфазы дрожжей Saccharomyces cerevisiae представляют собой важнейшую каскадную систему, отвечающую не только за ауторегуляцию клеток и межклеточных взаимодействий в физиологическом состоянии микроорганизма, но и за формирование клеточного ответа на воздействие экзогенных повреждающих факторов. Помимо таких факторов, как изменение кислотности окружающей среды, температуры, ГТфазы участвуют в активации защитных реакций клетки Saccharomyces cerevisiae в ответ на дефицит питательных субстратов, посредством активации процесса аутофагии. К сожалению, в литературе отсутствуют данные о влиянии модифицированных нуклеозидов и нуклеотидов на работу ГТфаз. Этот вопрос требует дальнейшего изучения.

1. Ballou C.E., Lipke P.N., Raschke W.C. 1974. Structure and immunochemistry of the cell wall mannans frоm Saccharomyces chevalieri, Saccharomyces italicus, Saccharomyces diastaticus, and Saccharomyces carlsbergensis. J Bacteriol 117: 461–467 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC285535/). 2. Bell M.W., Desai N., Guo X.X., Ghalayini A.J. Tyrosine phosphorylation of the alpha subunit of transducin and its association with Src in photoreceptor rod outer segments. J Neurochem. 2000 Nov;75(5):2006-19. (URL - https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1046/j.1471-4159.2000.0752006.x). 3. Belli M., Ramazzotti M., Chiti F. Prediction of amyloid aggregation in vivo. EMBO Rep. 2011 Jul 1;12(7):657-63. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3128957/) 4. Bi E., Park Н.О Cell polarization and cytokinesis in budding yeast. Genetics. 2012 Jun;191(2):347-87 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3374305/) 5. Briza P., Ellingerg A. et al., editors. Chemical composition of the yeast ascospore cell wall. The second outer layer consists of chitosan. J BiolChem. 1989 Aug 15;263(23):11569-74. (URL - http://www.jbc.org/content/263/23/11569.long) 6. Briza P., Ellinger А., Winkler G., Breitenbach М. Characterization of а DL-dityrosine-containing macromolecule frоm yeast ascospore walls. J BiolChem. 1990 Sep 5;265(25):15118-23. (URL -http://www.jbc.org/content/265/25/15118.long). 7. Briza P., Eckerstorfer М., Breitenbach М. The sporulation-specific enzymes encoded by the DIT1 and DIT2 genes catalyze a two-step reaction leading to a soluble LL-dityrosine-containing precursor of the yeast spore wall. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995 May 10; 91(10): 4524–4528. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC43818/). 8. Briza P, Kalchhauser H, et al., editors N,N'-Bisformyl dityrosine is an in vivo precursor of the yeast ascospore wall. Eur J Biochem. 1996 Jul 1;239(1):124-31. (URL - https://onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1111/j.1432-1033.1996.0124u.x). 9. Cabib Е., Arroyo J. How carbohydrates sculpt cells: chemical control of morphogenesis in the yeast cell wall. Nat. Rev. Microbiol. 2014 Sep;11(9):648-55. (URL - https://www.nature.com/articles/nrmicro3090) 10. Carlile J.M., Gooday G.W., Watkinson S.C. 2001. The fungi. 2nd edn. Elsevier, London. ISBN13: 978-0-12-738446-7 2 (URL - https://ru.scribd.com/doc/153209512/The-Fungi-2nd-Ed-2001-M-Carlile-S-Watkinson-And-G-Gooday) 11. Carman G.M., Han G.S. Phosphatidic acid phosphatase, a key enzyme in the regulation of lipid synthesis. J BiolChem. 2009 Jan 30;284(5):2593-7. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2631973/). 12. Carman G.M., Henry S.А. Phospholipid biosynthesis in the yeast Saccharomyces cerevisiae and interrelationship with other metabolic processes. Prog Lipid Res. 1998 Sep-Nov;38(5-6):361-99. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/10793889/) 13. Chiti F., Dobson C.M. Protein Misfolding, Amyloid Formation, and Human Disease: A Summary of Progress Over the Last Decade. Annu Rev Biochem. 2017 Jun 20;86:27-68. (URL -https://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.biochem.75.101304.123901?rfr_dat=cr_pub%3Dpubmed&url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori%3Arid%3Acrossref.org&journalCode=biochem). 14. Choi H.S., Su W.M. et al., editors. Phosphorylation of phosphatidate phosphatase regulates it membrane association and physiological functions in Saccharomyces cerevisiae: identification of SER (601), THR (723), AND SER (745) as the sites phosphorylated by CDC 28 (CDK-1)-encoded cyclin-dependent kinase. J BiolChem. 2011 Jan 14;286(2):1486-98 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21081492/). 15. Christodoulidou А., Briza P., Ellinger А., Bouriotis V. Yeast ascospore wall assembly requires two chitin deacetylase isozymes. FEBS Lett. 1999 Oct 29;460(2):275-9. (URL - https://febs.onlinelibrary.wiley.com/doi/full/10.1016/S0014-5793%2899%2901334-4). 16. Coluccio A.E., Rodriguez R.K., Kernan M.J., Neiman A.M. The yeast spore wall enables spores to survive passage through the digestive tract of Drosophila. PLoS One. 2008 Aug 6;3(8):e2873. doi: 10.1371/journal.pone.0002873. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2478712/). 17. Coluccio A., Bogengruber E. et al., editors. Morphogenetic pathway of spore wall assembly in Saccharomyces cerevisiae. Eukaryot Cell. 2004 Dec;3(6):1464-75. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC539034/) 18. Corinna C., Vladimir M. New Potential Cell Wall Glucanases of Saccharomyces cerevisiae and Their Involvement in Mating. J Bacteriol. 1999 Oct; 180(19): 5030–5037. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC107536/). 19. Dawes I.W., Hardie I.D. Selective killing of vegetative cells in sporulated yeast cultures by exposure to diethyl ether. Mol Gen Genet. 1974;131(4):281-9. (URL - https://link.springer.com/article/10.1007/BF00264859). 20. Dohlman H.G., Thorner J.W. Regulation of G protein-initiated signal transduction in yeast: paradigms and principles. Annu Rev Biochem. 2001; 70:704-52. (URL - https://www.annualreviews.org/doi/full/10.1146/annurev.biochem.70.1.703?url_ver=Z39.88-2003&rfr_id=ori%3Arid%3Acrossref.org&rfr_dat=cr_pub%3Dpubmed). 21. Eisenman H.C., Casadevall A. Synthesis and assembly of fungal melanin. Appl Microbiol Biotechnol. 2012 Feb;93(3):931-40. doi: 10.1007/s00253-011-3777-2. Epub 2011 Dec 16. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4318813/). 22. Fakas S., Qiu Y. et al., editors. Phosphatidate phosphatase activity plays key role in protection against fatty acid-induced toxicity in yeast. J BiolChem. 2011 Aug 19;286(33):29074-85 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3190715/). 23. Fowler D.M., Koulov A.V. Functional amyloid formation within mammalian tissue. PLoS Biol. 2006 Jan;4(1):e6. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1288039/). 24. Garcia-Mata R., Boulter Е., Burridge К. The «invisible hand»: regulation of RHO GTPases by RHOGDIs. Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2011 Jul 22;12(8):493-504. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3260518/). 25. Gebbink M.F., Claessen D. et al., editors. Amyloids - a functional coat for microorganisms. Nat. Rev. Microbiol. 2005 Apr;3(4):333-41. (URL -https://www.nature.com/articles/nrmicro1127). 26. Gilman A.G. G proteins: transducers of receptor-generated signals. Annu Rev Biochem. 1987;56:615-49. (URL - https://www.annualreviews.org/doi/abs/10.1146/annurev.bi.56.070187.003151). 27. Goldman R.C., Sullivan P.А., Zakula D., Capobianco J.О. Kinetics of beta-1, 3 glucan interaction at the donor and acceptor sites of the fungal glucosyltransferase encoded by the BGL-2 gene. Eur. J Biochem. 1996 Jan 15;227(1-2):372-8. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/7851411/). 28. Harold F.M. Force and compliance: rethinking morphogenesis in walled cells. Fungal Genet Biol. 2002 Dec;37(3):271-82. (URL - https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S1087184502005285). 29. Harold F.M. Molecules into cells: specifying spatial architecture. Microbiol Mol Biol Rev. 2005 Dec;69(4):544-64. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1306800/). 30. Han G.S., Wu W.I., Carman G.M. The Saccharomyces cerevisiae Lipin homolog is a Mg2+-dependent phosphatidate phosphatase enzyme. J Biol Chem. 2006 Apr 7;281(14):9210-8. Epub 2006 Feb 8. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1424669/). 31. Haruo S., Francesc P. Response to Hyperosmotic Stress. Genetics. 2012 Oct; 192(2): 289–318. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3454867/). 32. Hong S.P., Carlson M. Regulation of snf1 protein kinase in response to environmental stress. J Biol Chem. 2007 Jun 8;282(23):16838-45. Epub 2007 Apr 16. (URL - http://www.jbc.org/content/282/23/16838.long). 33. Isom D.G., Sridharan V. et al., editors. Protons as second messenger regulators of G protein signaling. Mol Cell. 2013 Aug 22;51(4):531-8 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3770139/). 34. Kaffman A., Herskowitz . Phosphorylation of the transcription factor PHO4 by a cyclin-CDK complex, PHO80-PHO85. Science. 1994 Feb 25;263(5150):1153-6 (URL -http://science.sciencemag.org/content/263/5150/1153.long). 35. Kalebina T.S., Farkas V. et al., editors. Deletion of BGL2 results in an increased chitin level in the cell wall of Saccharomyces cerevisiae. Antonie Van Leeuwenhoek. 2003;84(3):179-84. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/14574112/). 36. Kalebina T.S., Plotnikova T.A. et al., editors. Amyloid-like properties of Saccharomyces cerevisiae cell wall glucantransferase Bgl2p: prediction and experimental evidences. Prion. 2008 Apr-Jun;2(2):91-6. Epub 2008 Apr 18 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2634524/). 37. Kalebina T.S., Plotnikova T.A. Amyloid-like properties of Saccharomyces cerevisiae cell wall glucantransferase Bgl2p: prediction and experimental evidences. Prion. 2008 Apr-Jun;2(2):91-6. Epub 2008 Apr 18. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2634524/). 38. Kalebina T.S., Laurinavichiute D.K. et al., editors. Correct GPI-anchor synthesis is required for the incorporation of endoglucanase/glucanosyltransferase Bgl2p into the Saccharomyces cerevisiae cell wall. FEMS Microbiol Lett. 2002 Apr 23;210(1):81-5. (URL -https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1574-6968.2002.tb11163.x). 39. Karanasios E., Han G.S. A phosphorylation-regulated amphipathic helix controls the membrane translocation and function of the yeast phosphatidate phosphatase. Proc Natl Acad Sci U S A. 2010 Oct 12;107(41):17539-44. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2955120/). 40. Klis F.M, Ram A.F, De Groot P.W. 2007. A molecular and genomic view of the fungal cell wall. In Biology of the fungal cell (ed. Howard RJ, Gow NAR.), 2nd ed, The Mycota VIII, pp. 97–120. Springer-Verlag, Berlin (URL - https://link.springer.com/chapter/10.1007/978-3-540-70618-2_4). 41. Levin D.E. Regulation of cell wall biogenesis in Saccharomyces cerevisiae: the cell wall integrity signaling pathway. Genetics. 2011 Dec;189(4):1145-75 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3241422/). 42. Li X., Gerber S.A. Large-scale phosphorylation analysis of alpha-factor-arrested Saccharomyces cerevisiae. J Proteome Res. 2007 Mar;6(3):1190-7 (URL - https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/pr060559j). 43. Lin C.P., Kim C., Smith S.O., Neiman A.M. A highly redundant gene network controls assembly of the outer spore wall in S. cerevisiae. PLoS Genet. 2013;9(8):e1003700. doi: 10.1371/journal.pgen.1003700. Epub 2013 Aug 15 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3744438/). 44. Lynn R.R., Magee P.T. Development of the spore wall during ascospore formation in Saccharomyces cerevisiae. J Cell Biol. 1970 Mar;44(3):688-92. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2107973/) 45. Mah A.S., Elia A.E. et al., editors. Substrate specificity analysis of protein kinase complex Dbf2-Mob1 by peptide library and proteome array screening. BMC Biochem. 2005 Oct 21;6:22. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1277818/). 46. Mouyna I., Fontaine T., et al., editors. Glycosylphosphatidylinositol-anchored glucanosyltransferases play an active role in the biosynthesis of the fungal cell wall. J Biol Chem. 2000 May 19;275(20):14882-9. (URL - http://www.jbc.org/content/275/20/14882.long) 47. Mrsa V., Klebl F., Tanner W. Purification and characterization of the Saccharomyces cerevisiae BGL2 gene product, a cell wall endo-beta-1,3-glucanase. J Bacteriol. 1993 Apr;175(7):2102-6. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC204315/). 48. Muthukumar G., Suhng S. H. The Saccharomyces cerevisiae SPR1 gene encodes a sporulation-specific exo-1,3-beta-glucanase which contributes to ascospore thermoresistance. J Bacteriol. 1993 Jan; 175(2): 386–394. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC196152/). 49. Neiman. A.M. Sporulation in the Budding Yeast Saccharomyces cerevisiae. Genetics. 2011 Nov; 189(3): 737–765. doi: 10.1534/genetics.111.127126 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3213374/) 50. O'Hara L., Han G.S. et al., editors. Control of phospholipid synthesis by phosphorylation of the yeast lipin Pah1p/Smp2p Mg2+-dependent phosphatidate phosphatase. J Biol Chem. 2006 Nov 10;281(45):34537-48 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1769310/). 51. Oldham W.M., Hamm H.E. Heterotrimeric G protein activation by G-protein-coupled receptors. Nat Rev Mol Cell Biol. 2008 Jan;9(1):60-71. (URL - https://www.nature.com/articles/nrm2299). 52. O'Neill E.M., Kaffman A., Jolly E.R., O'Shea E.K. Regulation of PHO4 nuclear localization by the PHO80-PHO85 cyclin-CDK complex. Science. 1996 Jan 12;271(5246):209-12. (URL -http://science.sciencemag.org/content/271/5246/209.long). 53. Philip B., Levin D.E. Wsc1 and Mid2 are cell surface sensors for cell wall integrity signaling that act through Rom2, a guanine nucleotide exchange factor for Rho1. Mol Cell Biol. 2001 Jan;21(1):271-80. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC88800/). 54. Shellhammer J.P., Morin-Kensicki E. et al., editors. Amino acid metabolites that regulate G protein signaling during osmotic stress. PLoS Genet. 2017 May 30;13(5): e1006829. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5469498/). 55. Suda Y., Rodriguez R.K., Coluccio A.E., Neiman A.M. A screen for spore wall permeability mutants identifies a secreted protease required for proper spore wall assembly. PLoS One. 2009 Sep 25;4(9): e7184 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2743993/). 56. Trahey M., McCormick F. A cytoplasmic protein stimulates normal N-ras p21 GTPase, but does not affect oncogenic mutants. Science. 1987 Oct 23;238(4826):542-5. (URL - http://science.sciencemag.org/content/238/4826/542.long) 57. Uesono Y., Tanaka K., Toh-e A. Negative regulators of the PHO system in Saccharomyces cerevisiae: isolation and structural characterization of PHO85. Nucleic Acids Res. 1987 Dec 23;15(24):10299-309. (URL -https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC339945/). 58. Varki A, Cummings R.D, Esko J.D, et al., editors. Essentials of Glycobiology, Third Edition. Cold Spring Harbor (NY): Cold Spring Harbor Laboratory Press; 2015-2017. (URL-https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK453019/) 59. Verna J., Lodder A. et al., editors. A family of genes required for maintenance of cell wall integrity and for the stress response in Saccharomyces cerevisiae. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997 Dec 9;94(25):13804-9 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC28388/). 60. Westermark P., Benson M.D. A primer of amyloid nomenclature. Amyloid. 2007 Sep;14(3):179-83. (URL -https://www.tandfonline.com/doi/abs/10.1080/13506120701460923?journalCode=iamy20). 61. Wetzker R., Böhmer F.D. Transactivation joins multiple tracks to the ERK/MAPK cascade. Nat Rev Mol Cell Biol. 2003 Aug;4(8):651-7. (URL - https://www.nature.com/articles/nrm1173). 62. Wu W.I., Liu Y., et al., editors. Purification and characterization of diacylglycerol pyrophosphate phosphatase frоm Saccharomyces cerevisiae. J Biol Chem. 1996 Jan 26;271(4):1868-76. (URL - http://www.jbc.org/content/264/15/8641.long) 63. Wu W.I., Carman G.M. Regulation of phosphatidate phosphatase activity frоm the yeast Saccharomyces cerevisiae by phospholipids. Biochemistry. 1996 Mar 26;35(12):3790-6. (URL - https://pubs.acs.org/doi/abs/10.1021/bi952808f) 64. Xu S., Zhang G.Y. et al., editors. Effects of Rho1, a small GTPase on the production of recombinant glycoproteins in Saccharomyces cerevisiae. Microb Cell Fact. 2016 Oct 21;15(1):179. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27769287) 65. Yang S., Rosenwald A. A High Copy Suppressor Screen for Autophagy Defects in Saccharomyces arl1Δ and ypt6Δ Strains. G3 (Bethesda). 2017 Feb 9;7(2):333-341. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5295583/) 66. Ying Z.X., Jin M. ., et al., editors. Recurrent Mutations in the MTOR Regulator RRAGC in Follicular Lymphoma. Clin Cancer Res. 2016 Nov 1;22(21):5383-5393. Epub 2016 Jun 7. (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5093058/) 67. Zhu J., Zhu X., et al., editors. GOLGI TRANSPORT 1B Regulates Protein Export frоm the Endoplasmic Reticulum in Rice Endosperm Cells. Plant Cell. 2016 Nov;28(11):2850-2865. Epub 2016 Nov 1 (URL - https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5155349/)