Метод хроматофокусирования для разделения белков: возможности и ограничения

Ионообменная хроматография (ИХ) - это универсальный метод разделения белков, основанный на использовании различий в электростатическом заряде. В стандартном методе проведения ИХ, белки элюируются с использованием градиента соли с почти постоянным значением рН жидкой фазы. Это затрудняет процесс разделения белков вблизи изоэлектрической точки каждого белка в смеси. Хроматофокусировка устраняет многие недостатки ионообменной хроматографии, объединяя элементы, как ИХ, так и изоэлектрической фокусировки..

---

Work5 поможет выполнить курсовую работу к определённому сроку.

---

Таким образом, путем исследований была решена проблему основного ограничения метода хроматофокусирования. Вместо использования полиамфолитного буфера можно использовать простую (двух-, трехкомпонентную) смесь, что снижает стоимость проведения анализа. В ходе исследований были расширены возможности метода, который, в настоящее время, применим не только для разделения белков и пептидов в смесях, но и для очистки и разделения моноклональных антител. Меняя состав элюента, и подбирая подходящие ионообменные сорбенты метод хроматофокусировки, совместно с комплексообразовательной хроматографией, применим для разделения ионов металлов [12].

1. Sluyterman L., Wijdenes J. Chromatofocusing: Isoelectric focusing on ion-exchange columns: II. Experimental verification //Journal of Chromatography A. – 1978. – Т. 150. – №. 1. – С. 31-44. 2. Bates R. C., Kang X., Frey D. D. High-performance chromatofocusing using linear and concave pH gradients formed with simple buffer mixtures: I. Effect of buffer composition on the gradient shape //Journal of Chromatography A. – 2000. – Т. 890. – №. 1. – С. 25-36. 3. Kang X., Bates R. C., Frey D. D. High-performance chromatofocusing using linear and concave pH gradients formed with simple buffer mixtures: II. Separation of proteins //Journal of Chromatography A. – 2000. – Т. 890. – №. 1. – С. 37-43. 4. Kang X., Frey D. D. High-performance cation-exchange chromatofocusing of proteins //Journal of Chromatography A. – 2003. – Т. 991. – №. 1. – С. 117-128. 5. Вакштейн М. С., Иванов А. В., Нестеренко П. Н., Хасанова Е. М. Использование карбоновых кислот для формирования нисходящих градиентов pH внутри колонки, заполненной сверхсшитым полистиролом с карбоксильными группами //Вестник Московского университета. Серия 2. Химия. – 2003. – Т. 44. – №. 4. – С. 258-263. 6. Иванов А. В., Вакштейн М. С. Хроматофокусирование биполярных соединений на катионообменных колонках с помощью простых подвижных фаз //Молекулярные технологии. – 2007. – Т. 1. – №. 1. – С. 15-38. 7. Brorson K., Sheng H., Lute S., Soto Perez J., Frey D. D. Characterization and purification of bacteriophages using chromatofocusing //Journal of Chromatography A. – 2008. – Т. 1207. – №. 1-2. – С. 110-121. 8. Shen H., Li X., Bieberich C., Frey D. D. Serial displacement chromatofocusing and its applications in multidimensional chromatography and gel electrophoresis: II. Experimental results //Journal of Chromatography A. – 2009. – Т. 1216. – №. 6. – С. 977-984. 9. Kang X., Kutzko, J. P., Hayes, M. L., Frey, D. D. Monoclonal antibody heterogeneity analysis and deamidation monitoring with high-performance cation-exchange chromatofocusing using simple, two component buffer systems //Journal of Chromatography A. – 2013. – Т. 1283. – С. 89-97. 10. Guo H., Li X., Frey D. D. Development of chromatofocusing techniques employing mixed-mode column packings for protein separations //Journal of Chromatography A. – 2014. – Т. 1323. – С. 57-65. 11. Pinto N. D. S., Uplekar, S. D., Moreira, A. R., Rao, G., Frey, D. D. Immunoglobulin G elution in protein A chromatography employing the method of chromatofocusing for reducing the co‐elution of impurities //Biotechnology and bioengineering. – 2017. – Т. 114. – №. 1. – С. 154-162. 12. Иванов А. В., Смирнова Н. Ю., Вакштейн М. С. Разделение ионов металлов на карбоксильных сорбентах с применением техники хроматофокусирования //Журнал физической химии. – 2007. – Т. 81. – №. 4. – С. 704-709.